H2S 含量測定試劑盒說明書
可見分光光度法
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
產品內容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 3mL×1 管，4℃避光保存。
產品說明：
H2S 是一種新型氣態信號分子，存在于腦內的神經遞質，生理濃度的 H2S 對神經系統海馬的長時程增強功能具有重要的調節作用，并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。
H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍，亞甲基藍在 665nm處有大吸收峰，通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計1ml玻璃比色皿、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣品處理：
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清（漿）：直接測定。
二、測定步驟： （取1.5ml離心管，按照下表操作）
| 空白管 | 測定管 |
樣品（μL） |
| 250 |
H2O（μL） | 250 |
|
試劑一（μL） | 250 | 250 |
充分震蕩混勻 | ||
試劑二（μL） | 250 | 250 |
12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀 | ||
H2O（μL） | 500 | 500 |
12000rpm，4℃，離心 10min，去上清，留沉淀 | ||
試劑一（μL） | 250 | 250 |
試劑三（μL） | 250 | 250 |
充分震蕩混勻 | ||
試劑四（μL） | 250 | 250 |
12000rpm，4℃，離心10min，取上清 | ||
試劑五（μL） | 50 | 50 |
混勻，25℃靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管調零，測定665nm吸光值，記為A665。 | ||
三、H2S含量計算公式：
標準曲線回歸方程為：y = 0.0044x，R2 = 0.9988
（1）組織樣品
a.按照蛋白濃度計算
H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照樣本重量計算
H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
（2）液體樣本
H2S（μmol/L）= A665÷0.0044×V反總÷V樣= 727×A665
（3）細胞
H2S（μmol/104 cell）= A665÷0.0044×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量(萬個)）×10-3 =0.727×A665÷細胞數量（萬個）
V反總：反應總體積，0.8mL；V樣：反應中樣品體積，0.25mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL。
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